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熒光探針pcr試劑盒的相關(guān)知識點(diǎn)介紹

瀏覽次數:808發(fā)布日期:2022-07-25
  熒光探針pcr試劑盒的原理在于PCR擴增時(shí)在加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個(gè)報告熒光基團和一個(gè)淬滅熒光基團。探針完整時(shí),報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開(kāi)始時(shí),探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時(shí),Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。
 
  常用于熒光免疫法中標記抗原或抗體,亦可用于微環(huán)境,如表面活性劑膠束、雙分子膜、蛋白質(zhì)活性位點(diǎn)等處微觀(guān)特性的探測。通常要求探針的摩爾吸光系數大,熒光量子產(chǎn)率高;熒光發(fā)射波長(cháng)處于長(cháng)波且有較大的斯托克斯位移;用于免疫分析時(shí),與抗原或抗體的結合不應影響它們的活性。
 
  目前,熒光探針pcr試劑盒的方法主要有單點(diǎn)測定和電荷耦合裝置(CCD)熒光成像(包括用于微區分析的激光共聚焦熒光顯微鏡成像)。由于光電倍增管點(diǎn)掃描時(shí)間較長(cháng),激光照射強度高,很難抓住熒光早期變化。而CCD熒光成像的面陣大,成像視野廣,成像時(shí)間可以調節,因而檢測效果比較好。
 
  化學(xué)發(fā)光檢測的特點(diǎn)是設備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、分析速度快及靈敏度高?;瘜W(xué)發(fā)光成像分析(CLI)是將化學(xué)發(fā)光與成像技術(shù)相結合,從而具有分辨率高、多樣品同時(shí)檢測、光譜響應范圍寬以及靈敏度高等特點(diǎn)。已廣泛應用于凝膠、蛋白印記及微陣列芯片中的化學(xué)發(fā)光信號檢測。
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